分子診斷是應用分子生物學方法，通過檢測受檢個體或其攜帶病毒、病原體的遺傳?物質的結構或含量的變化而做出診斷的技術。其檢測對象主要為核酸和蛋白質，以核?酸分子為主，相比于發展成熟的免疫診斷、生化診斷等技術，分子診斷處于快速成長期，是體外診斷（In Vitro Diagnosis, IVD）領域發展最快的細分領域，具有檢測時間 短、靈敏度更高、特異性更強等優勢，被廣泛應用于傳染性疾病、血液篩查、遺傳性 疾病、腫瘤伴隨診斷等領域。

分子診斷技術的發展經歷了四個階段：

（1）第一階段：20 世紀 80 年代基于核酸分子雜交技術的遺傳病診斷；

（2）第二階段：20 世紀 90 年代聚合酶鏈式反應（PCR）的問世將分子診斷技術推 向更精準、更高效的階段特別是發展到第二代的熒光定量 PCR（qPCR）和第三代的 數字 PCR（dPCR）；

（3）第三階段是基于基因芯片的多指標、高通量基因檢測；

（4）第四階段是基于基因測序技術在 NIPT（無創產前診斷）、遺傳性腫瘤篩查及腫 瘤精準治療等方面的應用。

?

國內分子診斷起步較晚，發展速度高于全球。在精準醫療、個性化用藥等需求推動下，?分子診斷技術在全球得到飛速發展，根據火石創造數據顯示，2013-2019 年全球分子 診斷市場規模由 57 億美元增長至 113.6 億美元，年復合增長率為 12.18%，主要市 場玩家包括羅氏、雅培、西門子、強生等。國內分子診斷雖然起步較晚，但在消費升 級、政策扶持以及資本青睞等多重因素推動下，已經由產業導入期步入成長期。2013- 2019 年，我國分子診斷市場規模由 25.4 億元增長至約 132.1 億元，年復合增長率達 到 31.63%，雖然僅占全球市場規模的 16.86%，但是增速約為全球增速的 2.6 倍， 主要企業包括達安基因、凱普生物、華大基因、貝瑞基因、艾德生物等。

分子診斷領域主要包括?PCR（qPCR 和 dPCR）、二代測序技術（NGS）、熒光原位 雜交（FISH）、基因芯片等，其中 PCR 是目前應用最成熟、市場份額最大的技術平臺，在國內分子診斷中市占率為 40%，在國內獲批的分子診斷產品中，基于 PCR 技術的超過 90%。

與雜交技術和測序技術相比，PCR 技術主要優勢在于高靈敏度、易 于推廣，主要局限在于檢測位點單一且已知，多重基因聯合檢測時可涵蓋的基因數量 受限，目前已經發展到第三代數字 PCR（dPCR），短期內仍將是分子診斷主流技術 平臺；測序技術發展迅猛，雖然市占率較低但市場增速最快，其中二代測序技術 NGS （高通量測序）是目前測序領域應用最廣泛的技術，已經成為許多序列變異分析與科 研應用的主要選擇，但由于實驗操作復雜、成本高等原因，在臨床應用中仍處于起步 階段，應用前景廣闊。

?熒光原位雜交技術（FISH）

FISH 是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術，主要用于指 導腫瘤靶向藥物使用、腫瘤預后、腫瘤疾病分型診斷等領域，是檢測 HER-2 基因狀 態的金標準，目前在大多數省份和地區已經納入醫保。

FISH 全稱熒光原位雜交技術， 原理是利用已知的 DNA 變異序列，與被檢測的樣本 DNA 序列雜交、互補配對，從 而發現樣本 DNA 的異常情況，主要用于了解基因或染色體是否發生擴增、缺失、融 合或斷裂，檢測樣本來源廣泛（組織、脫落細胞、羊水、血液、骨髓等），且不僅限 于新鮮樣本，2-3 年的石蠟樣本都可以檢測；同時，FISH 檢測成本較低而且在大多 數省份和地區都被納入醫保范疇。FISH 應用最多的場景是 DNA 擴增檢測，《2014 年 NCCN 乳腺癌臨床實踐指南》和《乳腺癌 HER2 檢測指南 2014 版》均指出 FISH 是 檢測 HER2 基因狀態的“金標準”，目前 Roche、Abbot 等研發的 HER-2 擴增檢測 試劑盒已獲得 FDA 批準。

基因芯片技術

基因芯片技術又稱?DNA 微陣列技術，是將大量已知 DNA 序列做成探針，集成在同 一芯片上與標記樣品分子進行雜交，從而獲得樣本序列信息，可以實現對大量目標 基因同時進行檢測，具有成本相對較低（比如微基因的 WeGene檢測套件僅 599元）、 檢測效率較高的優勢，主要應用于消費級基因檢測、病毒分型、耐藥突變位點檢測、 遺傳基因和腫瘤基因檢測等領域。相比基因芯片產業在發達國家的高速發展，我國基?因芯片行業市場尚處于起步階段，代表企業包括賽樂奇、博奧生物、百奧科技、達安?基因等，目前獲批的基因芯片診斷試劑盒主要應用在?HPV 病毒基因分型、乙肝病毒 基因分型和耐藥突變位點檢測、腫瘤基因突變等領域，獲批的基因芯片相關儀器較 少。在國家相關政策和終端需求不斷擴大的推動下，我國基因芯片技術已經進入產業 化探索階段，根據沙利文數據顯示，中國基因芯片行業市場規模從 2014 年的 35 億 元增長至 2018 年的 95.1 億元，年復合增長率為 28.4%。

1.2 PCR：分子診斷主流技術平臺，臨床診斷“金標準”

PCR（聚合酶鏈式反應）是指利用 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）在體外條件 下，催化一對引物間的特異 DNA 片段合成的基因體外擴增技術。PCR 是生物體外 的特殊 DNA 復制，最大的特點是能將微量的 DNA 大幅擴增。以實時熒光?PCR 技術 為例，通過 PCR 技術進行分子診斷的主要流程包括：

1.核酸的提取和純化：使用核酸提取試劑從病毒、細菌等中提取出 DNA；

2. 核酸在引物約束下特異性的 PCR 擴增：在提取的 DNA 中加入擴增需要的反應 液（酶、復制需要的原料、引物等），在 PCR 儀中完成擴增過程；

3. 擴增產物的檢測：通過熒光標記法檢測 DNA 含量，從而判斷病毒 DNA 含量，給 出診斷結果。

PCR 技術最大的特點就是靈敏度高、特異性好、及時方便，在基礎研究以及醫學診 斷、法醫學和農業科學等各大領域應用廣泛。在臨床診斷中，PCR 技術具有諸多優 勢：靈敏度高，靶細胞檢出率可達 1/100 萬，病毒檢測靈敏度≥3RFU，最小細菌檢 出率為 3 個，檢測樣本純度要低，僅需 DNA 粗提取；擴增反應在 2-4 小時內完成， 使用簡便、快捷。作為臨床診斷的“金標準”技術，PCR 廣泛應用于血站核酸檢測、 疾控核酸檢測、臨床核酸檢測等領域，其中，在傳染病診斷和血篩檢測中，PCR 技 術能縮短診斷的“窗口期”并且可以定量對病原體進行檢測，相比于傳統的免疫診斷 方式，具有不可替代的優勢，基于 PCR 技術的分子診斷是醫院對傳染病診斷的“金 標準”。

PCR 經過三代技術更迭，精確度和靈敏度不斷提高。PCR 技術最早由穆勒于 1985 年發明，經歷了第一代定性 PCR、第二代定量 PCR 和數字 PCR 三代技術迭代，其 中第二代定量 PCR 包括熒光定量 PCR（qPCR）以及在其基礎上分化出來的 ARMS （突變擴增阻滯系統）和 HRM（高分辨溶解曲線）。三代技術的主要差異如下：

? 第一代定性 PCR 技術：采用瓊脂糖凝膠電泳對?PCR 擴增產物進行分析，存在 交叉污染、檢測耗時長、只能做定性檢測等缺點，目前處于衰退期，已基本被淘 汰；

? 第二代熒光定量 PCR（qPCR）技術：qPCR 在一代定量 PCR 的基礎上引入熒光探針標記法從而實現定量檢測，目前發展最成熟、應用最廣泛、臨床普及率高， 為現階段主流應用平臺，正處于從成長期向成熟期過渡的階段，市場增速在 20% 以上；

? 第三代數字 PCR（dPCR）技術：dPCR 是在 PCR 原理的基礎上利用芯片和熒 光檢測技術進行核酸絕對定量檢測。芯片技術是 dPCR 的核心工藝，利用對樣 品進行分液處理進而實現“單分子模板 PCR 擴增”，達到定量檢測的目的，具 有更高的精確度和靈敏度，目前處于導入期，市場增速在 10%-15%。

?

?

二代?PCR：主流分子診斷平臺，伴隨診斷和感染性疾病領域為主

qPCR（熒光定量 PCR）是目前應用最成熟、臨床應用最廣泛的技術平臺。qPCR 在 國內外均為分子診斷臨床應用最廣泛的技術平臺，尤其是在感染性疾病（病毒性肝 炎、性病和其他病菌/病毒類等）和腫瘤伴隨診斷領域，目前仍以 qPCR 技術平臺為 主。據不完全統計，截至 2020 年 5 月 11 日，國家藥監局共批準了 806 個 PCR 類 產品，其中熒光定量 PCR（qPCR）產品占比高達 85.11%。在伴隨診斷領域，NMPA 獲批的伴隨診斷產品中有 60%都是基于 qPCR 技術，而 FDA 批準的 39 個伴隨診斷 產品基于 qPCR 技術的產品占比也高達 38.46%（15 個）。

?

?國內?PCR 行業競爭激烈，不同細分領域龍頭效應顯著。二代?PCR 技術門檻相對較 低，國內獲批的 PCR 檢測產品數量多、競爭激烈，主要企業包括達安基因、艾德生 物、凱普生物、之江生物、碩世生物、透景生物、圣湘生物等。

從獲批的 PCR 檢測試劑盒數量維度看，達安基因擁有 38 種基于 qPCR 技術的檢測試劑盒取得 NMPA 的批文；從不同細分醫療器械創新網維度看，各家產品線重合度較高，尤其是優生優育、性 傳播疾病、HPV 檢測等領域競爭激烈，但艾德生物、凱普生物、亞能生物憑借多年 在不同細分領域的先發優勢、技術積累以及渠道優勢等分別在伴隨診斷、HPV 檢測、 地中海貧血檢測領域處于絕對領先地位，其中凱普生物在 HPV 檢測領域占據 1/3 市 場份額，艾德生物在 PCR 伴隨診斷領域具有絕對領先優勢。?

第三代數字?PCR（dPCR）：應用前景廣闊，未來發展趨勢

和?qPCR 相比，dPCR 優勢包括：靈敏度高（可以達到單個核酸分子）、無需標準曲 線或參照基因進行對比來測量核酸量、適合環境復雜樣品的檢測、能夠有效區分濃 度差異微小的樣品。dPCR 在國內尚處于起步階段，目前僅有南京科維思生物的 HER2 基因擴增檢測試劑盒（數字 PCR 法）獲批，在腫瘤伴隨診斷、腫瘤早篩、傳 染病檢測、NIPT、藥物基因組學等領域具有較大臨床應用潛力和優勢。根據沙利文 數據顯示，中國 dPCR 行業市場規模從 2013 年的 14.6 億元增加至 2017 年的 72 億 元，CAGR=29.2%，到 2022 年市場規模預計將達到 266.6 億元。

1.3 高通量測序（NGS）：引領分子診斷走向高端，應用前景廣闊

測序技術更迭速度快，二代高通量測序（NGS）為市場商用主流。從?1977 年第一代 DNA 測序技術（Sanger 法）發展至今，測序技術經歷了第二代高通量測序（NGS）、 第三代單分子測序技術和第四代納米孔測序技術的發展變革，各代技術醫療器械創新網不 盡相同，各有優缺點，目前處于三代技術并存的局面。第一代 Sanger 測序技術具有 測序讀長較長、準確率高的優點，但由于通量低、成本高等因素沒有得到大規模應用；二代測序技術自 2005 年以來快速發展，憑借高通量、低成本、測序時間端等優勢， 在全球測序市場中仍占據主導地位；第三/四代技術在測序流程、測序時間和讀長上 進一步優化，在 ctDNA 測序、單細胞測序等也具有明顯優勢，是未來發展趨勢，但 目前由于錯誤率較高、分析軟件不夠豐富等原因，商用受到一定限制，未來隨著技術 的改善有望進入成熟應用階段。

?

?

高通量測序技術（NGS）又稱為下一代測序技術，是指通過模板 DNA 分子的化學 修飾，將其錨定在納米孔或微載體芯片上，利用堿基互補配對原理，在 DNA 聚合 酶鏈反應或 DNA 連接酶反應過程中，通過采集熒光標記信號或化學反應信號，實 現堿基序列的解讀，一次性可完成幾十萬至上百萬條序列的測定。NGS 技術可提供 滿足評估目標靶向基因所需的擴展性、速度和分辨率。可以同時對許多樣本中的多個 基因進行評估，如此便可運行多個獨立的分析，從而節省時間并降低成本。另外，與 范圍更廣的方法（如全基因組測序）相比，靶向基因測序生成的數據量更少，更易管 理，因而分析起來更加輕松。

文章來源：摘自未來智庫《分子診斷行業深度研究及投資策略：精準醫療，看PCR還是NGS》，如涉及侵權，請聯系刪除。