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患者樣品檢測結果與真值間的偏離主要有三個因素，包括系統偏差、隨機偏差和干擾。分析干擾是指在測定某分析物的濃度或活性時，受另一種非分析物影響而導致測定結果增高或降低。
在某種程度上由一個干擾物引起的未預料作用可使臨床檢驗結果具有顯著誤差。
生產企業和實驗室有必要在醫學需要的基礎上評價干擾物，告知臨床已知有醫學意義的誤差來源。
一、概? ? 念
分析特異性：一種分析方法檢測某種成分的能力或者只對一種指定的分析反應物而不是樣品中其他物質。
在《中國醫藥報》中分析特異性被定義為：測量程序只測量被測量物的能力。
干擾：由于另一成分的影響或樣品的特性，待測的一定濃度的被分析物出現有臨床意義的偏倚。
內源性干擾：樣品中一些生理物質（膽紅素，血紅蛋白）對某些物質分析時引起的干擾。
外源性干擾：源自體外的物質（如藥物、樣品防腐劑或樣品污染物）對某些物質分析時引起的干擾。
干擾物/干擾物質：樣品中不同于分析物且能引起測試結果偏倚的組分。
基質：樣品中除分析物之外的其他成分。
基質效應：基質對分析物測定結果的影響。如粘性，表面張力，pH值等。
交叉反應：在結構上和抗原相似的干擾物在免疫學方法中與抗體發生的反應。
二、干擾機制
物理效應：干擾物與被分析物相似，比如熒光，顏色，光散射，洗脫位置或者是可以被探測或被測量的電極反應。
化學效應：干擾物通過競爭反應物而抑制反應，或者抑制指示劑反應，也可以通過配位絡合或沉淀反應而改變被分析物的形式。
酶的抑制：干擾物通過隔離金屬激活劑，結合到催化部位或氧化關鍵巰基而改變酶的活性。
基質效應：干擾物改變樣品基質的物理特性，比如粘度、表面張力，濁度或離子強度，引起分析物的測量結果明顯改變。
交叉反應：在結構上與待測物抗原相似，干擾物在反應時與抗體發生交叉反應，從而導致測量不準確。
水被取代：非水融性物質（蛋白質、脂質）通過取代血漿水的容量而影響以活性測定為基礎的測量方法。
非特異性：干擾物以和被分析物相同的方式發生反應。
三、分析特異性試驗的方案
在EP7文件中推薦了兩種分析特異性評價方案，“干擾篩選方案”和“患者樣品偏倚分析方案”。但每一種方案都有其優點和內在局限性，生產廠家或實驗室最好能綜合應用兩種方案，方可較全面評估產品分析特異性能。
擾篩選方案：此方法具體分為兩步
第一步先進行配對差異試驗，即將潛在的干擾物添加到樣品中評價干擾效應，然后評價相對于未添加干擾物的對照樣品的偏倚。
根據分析物情況進行幾個醫學決定水平濃度處的試驗，最通常的方法是在高濃度下，對一系列可能的干擾物做初步篩選；
第二步劑量效應試驗，用含有干擾物高濃度水平和濃度水平的兩個樣品，通過精確定量吸樣，制成一些列不同濃度的測試樣品。可以確定干擾物濃度和干擾度之間的關系的試驗方法。
干擾篩選方案由于是人為加入干擾物，存在以下局限性
添加到樣品中的化合物的特性可能不同于在體內自然循環狀態下的化合物；
試驗樣品基質不代表典型的有問題的臨床樣品；
樣品中真實的干擾物可能不是原來的藥物，而是代謝產物；
實驗濃度太高或太低以致不真實。
患者樣品偏倚分析:
選擇特定患者樣品，如心臟，腎臟或肝臟疾病患者樣品，含有高血脂，高膽紅素或高血紅蛋白的樣品，用過某種可能有干擾藥物的患者樣品。用參考方法（或比較方法）和試驗方法同時測定，將結果進行對比，以確定試驗方法是否存在干擾。
此方案需要參考方法或者具有低干擾性和高特異性的比較方法，已確定在比較研究中的“真值”。
該方案試驗變異缺乏控制對照，存在以下局限性:
此方案只能證明偏倚和估計的干擾物質某水平的相關性，而不能證明其因果關系；
患者通常服用多種藥物，可能導致內源性代謝物濃度的增高，難以證實何種藥物的干擾作用;
干擾物可能不存在于該批患者的測試樣品中;
樣品不新鮮，一些不穩定的組分可能丟失。
小編綜合考慮我國國內十余篇檢測試劑注冊審查指導原則和《WS/T416-2013 干擾實驗指南》，其中的法規并沒有強制要求進行“患者樣品偏倚分析方案”評估，而且考慮其樣本獲取較難，實驗的可行性較低；
下面著重介紹“干擾篩選方案”的具體操作步驟，不再對“患者樣品偏倚分析方案”做過多介紹。
四、干擾篩選方案步驟
?配對差異試驗
圖1:配對差異試驗步驟
1、基礎樣品：從健康沒有進行藥物治療的個體獲得適當類型（血清，全血，尿液）的新鮮樣品。
注意如果難以獲得新鮮樣品，可用合適的凍干或冷凍的樣品代替，但需要注意的是冷凍樣品中是否含有防腐劑，穩定劑或促凝劑等，這些物質也會導致干擾效應。
確定批內差：選擇含一定濃度分析物且不含干擾物的樣品，最好選擇兩個濃度，每個濃度重復檢測10次，計算其均值和批內標準差。
2、根據產品特點，確定差別的標準dma；
3、根據公式計算含干擾物樣品所需的重復測量次數n=
其中在z1-a\2是正太分布時雙側檢驗100（1-α）%的百分位值；? Z1-β\2是正太分布時100（1-β）%的百分位值；S：批內標準差；dmax是分析物在某測試濃度水平時的最大允許干擾值；
比如，生產廠家要檢測可接受干擾程度為1.5mg/ml的干擾效應，95%的置信限（α=0.05）和95%的檢驗效能（β=0.05），批內精密度為1.0mg/ml，則代入公式
N=2[(1.96+1.645)×1.0/1.5]2=11.6≈12，即每一個測試和對照樣品重復次數應為12次。
4、根據步驟③確定的重復檢測數，準備試驗組樣品。
先將合適且純度較高的干擾物進行溶解或稀釋，可供選擇的溶劑有：試劑等級的水，稀 釋的HCl或NaOH，乙醇或甲醇，丙酮，二甲基亞砜（DSMO）等。
向步驟①中所述的基礎樣品中加入上述干擾物溶液作為對照組樣品，盡可能小地稀釋樣品基質，最好小于5%。
5、根據步驟③確定的重復檢測數，準備對照組樣品。
向步驟①所述的基礎樣品中加入干擾物的溶劑作為對照組樣品，其添加體積與試驗組相同。
6、按交互順序測試對照組和試驗組樣品進行測試；
7、數據分析：計算dobs和dc，其中dobs=
其中dnull為無效假設規定的值，通常為0；n為重復測試次數，s為批內標準差；
8、結果解釋：當dobs≤dc時，則認為該物質引起偏倚小于 dmax，不是干擾物質；若dobs＞dc時，則認為該物質引起干擾，應進行劑量效應試驗，進一步確定其干擾效應。
劑量效應試驗方案
劑量效應試驗是確定干擾物濃度和干擾度之間的關系，干擾度是測試范圍之內任何干擾物濃度的效應估計。
如果配對差異試驗方案中的分析物出現干擾效應，則應通過劑量效應試驗，以確定干擾物在不同濃度時的干擾度，干擾物的系列濃度應通過高值樣品和對照樣品混合制備。
準備高濃度干擾物樣品和基礎樣品；
高濃度干擾物樣品：向基礎樣品中加入稀釋好的干擾物，制備成一定濃度干擾物的樣品。
制備0%，25%，50%，75%，100%高濃度待測樣品；
3.在同一分析批次內測定上述5個樣品，每個濃度水平重復測3次;
4.計算低濃度樣品平均值，其他各組結果減去該最低濃度樣品的平均值，進行回歸分析;
5.結果解釋：根據步驟④所進行的回歸分析，可得到干擾物在不同濃度的干擾度，干擾物無論是呈現線性干擾還是非線性干擾，根據回歸曲線，都可以計算出干擾物在一定濃度時對分析物檢測結果的干擾程度。從而可以排除干擾物的影響，準確得到分析物的量。
五、干擾試驗報告
主要包括以下內容：
被評價檢測系統的名稱、品牌、型號、所用試劑、校準品和質控品的生產廠家及批號。
被測量的名稱
被評價干擾物化學名稱或通用名稱
干擾評價方案依據
干擾試驗中使用的樣品類型及被測量濃度與干擾物濃度；
表述干擾效果的相關數據或方程；
描述干擾效果時，可用以下方式：列出干擾物的特定濃度，低于此濃度未觀察到具臨床意義的干擾；列出干擾物的特定濃度，高于此濃度可引起超過干擾標準的偏差；
六、總? 結
本文依據EP7以及《WS/T416-2013 干擾實驗指南》，對如何評估產品的分析特異性的方法進行了介紹。
根據小編對我國國內大部分檢測試劑盒注冊技術審查指導原則理解，審評中心一般將分析特異性分為兩部分，一部分為交叉反應，易產生交叉反應的抗原，抗體及嗜異性抗體等的驗證。
另一部分為干擾物質，樣品中常見干擾物質對檢測結果的影響，如高脂，黃疸，類風濕因子，抗凝劑等干擾因子的研究。如在《2019新型冠狀病毒抗原抗體檢測試劑注冊技術審評要點》中，明確要求交叉反應要對HKU1，OC43，H1N1，等進行驗證，要求干擾物質中對膽紅素，血脂，血紅蛋白，類風濕因子等進行驗證。
但值得說明的是，由于不同廠家所用檢測抗體不同，方法學不同，其對應的交叉反應的物質和干擾物也不盡相同。
目前沒有一種方法可以有效的鑒別所有的干擾物，一些干擾物，如藥物代謝產物在篩選實驗中不能被鑒別出，而一些物質又可能被錯誤的劃分為干擾物，如非天然后添加的物質。路漫漫其修遠兮，吾將上下而求索。
因此，生產廠家和實驗室的研發人員都應盡可能弄清實驗方法的特異性以及干擾物質給患者樣品帶來的影響，除根據相關文獻確定干擾物外，還應開展試驗驗證，評價其醫學意義并設計改進方案等。
